原核表达的目的

一:原核表达 目的蛋白不表达怎么办

目的蛋白的表达跟基因本身关系密切,载体,表达条件关系也很大。空载体能表达不代表你的蛋白能在该条件下表达。

二:原核表达的介绍

广义的原核表达,是指发生在原核生物内的基因表达。狭义的原核表达,常出现于生物工程中。是指通过基因克隆技术,将外源目的基因,通过构建表达载体并导入表达菌株的方法,使其在特定原核生物或细胞内表达。

三:原核表达的原核表达系统

一个完整的表达系统通常包括配套的表达载体和表达菌株。如果是特殊的诱导表达还包括诱导剂,如果是融合表达还包括纯化系统或者Tag检测等等。选择表达系统通常要根据实验目的来考虑,比如表达量高低,目标蛋白的活性,表达产物的纯化方法等等。

四:原核表达目的基因需要加起始密码子吗

其实简单一点,可以直接克隆到表达载体上,送去测序确定之后再表达;我们以前一直这么做的;但是有些情况下,比如表达载体不是诱导型的,或者表达的蛋白对大肠杆菌宿主菌毒性很大,影响菌的生长,导致菌生长困难、提质粒困难等等,就会先克隆到一个克隆载体上面,做测序确定;然后再克隆到表达载体上.

通常来说我不太喜欢做两次克隆,总是酶切转化筛选;我喜欢选控制比较严谨的可调控性原核表达载体,比如pET系列的多个载体,直接把目的基因克隆上去.

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